健顺生物MDCK细胞无血清化学界定悬浮培养基

Celhappy®Advanced RPMI 1640是健顺生物开发的适用于MDCK贴壁细胞的低血清培养基，使用的血清为2.5%的NBCS，降低生产纯化成本。在提高细胞密度、延长细胞活率的同时缩短细胞倍增时间，能使细胞在较短时间达到高密度水平。

Celkey® CDMDCK SFM 和CDMDCK Production Medium是健顺生物针对MDCK悬浮细胞开发的无血清化学界定细胞培养基。不使用血清，大大降低生产纯化成本。在提高细胞密度、延长细胞活率的同时缩短细胞倍增时间，能使细胞在较短时间达到高密度水平。同时，健顺生物可根据您提供的MDCK细胞进行培养基配方及细胞培养工艺的个性化开发定制服务。

1. MDCK贴壁低血清（2.5%NBCS）细胞在DMEM与AdvancedRPMI 1640培养基中稳定性传代：

图1. MDCK贴壁细胞在DMEM+10 % NBCS与Advanced RPMI 1640+2.5 % NBCS培养基中传代对照试验

图2. MDCK贴壁细胞在DMEM+10 % NBCS与Advanced RPMI 1640+2.5 % NBCS培养基中传代倍增时间对比

从上图中可以看出，MDCK细胞在Advanced RPMI 1640+2.5 % NBCS的培养条件下，细胞生长优于DMEM+10% NBCS的培养条件，细胞活率也维持在95%以上，倍增时间也缩短至16h左右。

2. MDCK悬浮细胞在无血清，化学界定CD022培养基中的传代实验

图3. MDCK悬浮细胞在无血清Celkey® CD MDCK SFM培养基中的的稳定性传代

图4. MDCK悬浮细胞在无血清Celkey® CD MDCK SFM培养基中的倍增时间

图5. MDCK悬浮细胞在无血清Celkey® CD MDCK SFM培养基中的直径

从图3~5可以看出，悬浮MDCK细胞在无血清Celkey® CD MDCK SFM培养基中生长良好。接种密度为1.0* 10e6 cells/mL，最高细胞密度可以达到6~8*10e6 cells/mL，而且细胞活率在传代的过程中始终维持在95%以上，倍增时间逐渐缩短至30h以内，细胞大小均一，在15um~16.5um之间。

3. MDCK悬浮细胞在2L生物反应器中的生长:

图6  MDCK悬浮细胞在2L生物反应器中的生长曲线

由图6可以看出，MDCK细胞在生物反应器中的生长比在卫星摇瓶快，在第6天即达到peak VCD，为12* 10e6 cells/mL。细胞在对数期的快速生长有利于后续的接毒实验的进行。

4. MDCK悬浮细胞接毒实验

图7  MDCK接入某禽流感病毒（a毒）后的产量

图8  MDCK接入某禽流感病毒（b毒）后的产量

如图7~8所示，MDCK细胞接种在Celkey® CD MDCK SFM培养基中培养。培养第三天，接入病毒a和b吸附1h后，补加相同体积的CD MDCK Production Medium，每隔24h测HA，其中a毒产量达到211，b毒产量达29。

MDCK细胞无血清化学界定培养基

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